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ELISA實(shí)驗可能出現的11個(gè)問(wèn)題及原因分析
以下是天津本生ELISA實(shí)驗中可能出現的11個(gè)常見(jiàn)問(wèn)題及其原因分析，綜合多個(gè)專(zhuān)業(yè)來(lái)源整理：
一、顯色弱或無(wú)信號
試劑活性降低?
運輸/保存溫度過(guò)高或試劑過(guò)期導致酶失活
孵育條件不當?
溫度未達37℃或時(shí)間不足，抗原抗體結合不充分
加樣誤差?
移液器不準、吸頭殘留液體或加樣速度過(guò)快導致量不足
二、高背景/假陽(yáng)性
洗滌不凈?
洗液量不足、洗板針堵塞或浸泡時(shí)間過(guò)短，未結合物質(zhì)殘留
非特異性結合?
封閉不充分或樣本中血紅蛋白/細菌污染干擾
孵育過(guò)度?
溫育時(shí)間過(guò)長(cháng)或溫度過(guò)高
三、白板(全板無(wú)顯色)
試劑錯用?
誤將終止液當作洗滌液或漏加酶標抗體
底物失效?
TMB/H2O2配制過(guò)久或未避光保存
四、重復性差(CV>15%)
操作不一致?
加樣時(shí)間/速度差異大或復孔間洗滌力度不均
移液器誤差?
槍頭密封性差或未校準導致加樣量波動(dòng)
五、標準曲線(xiàn)異常
稀釋錯誤?
標準品復溶不充分或梯度稀釋比例錯誤
孔間污染?
加樣時(shí)液體濺灑或槍頭交叉使用
六、陰性對照顯陽(yáng)性
交叉污染?
樣本/試劑污染或洗板不凈
封閉失效?
封閉液濃度不足或孵育時(shí)間過(guò)短
七、顯色過(guò)快/過(guò)慢
酶濃度異常?
HRP標記抗體過(guò)量或失活
環(huán)境干擾?
室溫過(guò)高或底物接觸金屬器械
八、孔間顯色不均
液體蒸發(fā)?
孵育時(shí)未貼封板膜導致邊緣孔干燥
氣泡干擾?
加樣時(shí)產(chǎn)生氣泡影響反應界面
九、樣本檢測值異常
預處理不當?
溶血、脂血或反復凍融破壞靶標
稀釋錯誤?
未預實(shí)驗確定合適稀釋倍數
十、酶標板花板
纖維蛋白殘留?
血清未充分凝固或離心不凈
洗板沖擊力不足?
手工洗板時(shí)液體未垂直注入孔底
十一、讀值漂移
終止后延遲?
加終止液超過(guò)15分鐘未讀板
波長(cháng)設置錯誤?
酶標儀未調至TMB最佳吸收峰(450nm)
建議實(shí)驗前嚴格檢查試劑狀態(tài)、校準儀器，并設置合理的質(zhì)控對照。若問(wèn)題持續，可聯(lián)系試劑廠(chǎng)商獲取技術(shù)支持。
注：以上資料僅供參考，具體請咨詢(xún)技術(shù)老師或品牌供應商。
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