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　　以下是植物ACC合成酶(ACS)ELISA試劑盒的實(shí)驗使用說(shuō)明：

　　BS-7993  植物ACC合成酶(ACS)ELISA試劑盒

　　一、實(shí)驗原理

　　采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。預先包被植物ACC合成酶(ACS)抗體的微孔板中依次加入標本、標準品和HRP標記的檢測抗體，經(jīng)溫育洗滌后，TMB底物在過(guò)氧化物酶催化下顯色(藍色→黃色)，顏色深淺與ACS含量呈正相關(guān)，通過(guò)450nm波長(cháng)測定OD值計算濃度。

　　二、樣本處理

　　血清?：無(wú)熱原試管采集，避免細胞刺激，1000×g離心10分鐘分離;

　　血漿?：EDTA/檸檬酸鹽/肝素抗凝，3000×g離心30分鐘取上清;

　　細胞上清液?：3000×g離心10分鐘去除顆粒;

　　組織勻漿?：生理鹽水搗碎后離心取上清;

　　保存?：分裝凍存于-20℃，避免反復凍融。

　　三、試劑盒組成

　　組分 規格 數量

　　30倍濃縮洗滌液 20ml 1瓶

　　酶標試劑 6ml 1瓶

　　酶標包被板 12孔×8條 1板

　　標準品 0.5ml 1瓶

　　顯色劑A/B液 各6ml 各1瓶

　　終止液 6ml 1瓶

　　四、操作步驟

　　標準品稀釋?：按說(shuō)明書(shū)梯度稀釋原倍標準品;

　　加樣?：

　　空白孔：不加樣品

　　標準孔：50μl標準品

　　樣本孔：40μl稀釋液+10μl樣本(5倍稀釋);

　　溫育?：37℃孵育30分鐘，封板膜覆蓋;

　　洗滌?：棄液后加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒重復5次，拍干;

　　顯色?：每孔加顯色劑A/B液各50μl，37℃避光顯色10分鐘;

　　終止?：每孔加50μl終止液;

　　檢測?：5分鐘內于450nm讀取OD值。

　　五、注意事項

　　試劑盒保存于2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘;

　　濃縮洗滌液結晶需水浴加熱溶解;

　　結果計算時(shí)需乘以稀釋倍數(如5倍);

　　不同批號組分不可混用(洗滌液/終止液除外)。

　　六、自備器材

　　酶標儀(450nm)

　　移液器(0.5-1000μL范圍)

　　37℃恒溫箱。

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