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小鼠短鏈脂肪酸(SCFA)ELISA試劑盒實(shí)驗使用說(shuō)明書(shū)?
(基于試劑盒通用操作流程整理,供參考)
?一、試劑盒基本信息?
?檢測目標?:小鼠糞便、血清或組織樣本中的短鏈脂肪酸(如乙酸、丙酸、丁酸等)。
?檢測原理?:基于競爭性ELISA法,通過(guò)特異性抗體結合SCFA,顯色后通過(guò)OD值定量。
?適用樣本?:血清、糞便懸液、腸道內容物或組織勻漿液。
?二、試劑盒組成?
組分數量保存條件
SCFA標準品(凍干粉)1瓶-20℃(溶解后4℃保存)
預包被微孔板96孔4℃
酶標試劑(HRP)1瓶4℃(避光)
顯色液A/B各1瓶4℃(避光)
終止液1瓶室溫
樣本稀釋液1瓶4℃
?三、實(shí)驗步驟?
?1. 樣本前處理?
?糞便/腸道內容物?:取50-100mg樣本,加入1mL PBS勻漿,離心(3000rpm,10min),取上清備用。
?血清?:直接使用,避免反復凍融。
?組織?:按1:9比例(重量/體積)加入PBS勻漿,離心后取上清。
?2. 標準品稀釋?
用樣本稀釋液將凍干標準品復溶,梯度稀釋為6個(gè)濃度(如:0、5、10、20、50、100 μmol/L)。
?3. 檢測流程?
?加樣?:
標準品孔:每孔50μL標準品。
樣本孔:每孔50μL待測樣本。
空白孔:50μL樣本稀釋液。
?加酶標試劑?:每孔加入50μL酶標試劑(空白孔除外),37℃孵育30min。
?洗板?:甩干液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30s后棄去,重復5次。
?顯色?:每孔依次加入顯色液A/B各50μL,37℃避光孵育15min。
?終止?:每孔加入50μL終止液,立即測定OD450nm值。
?四、數據分析?
?標準曲線(xiàn)?:以標準品濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,繪制曲線(xiàn)(推薦四參數擬合)。
?樣本計算?:根據標準曲線(xiàn)方程,計算樣本中SCFA濃度(需乘以稀釋倍數)。
?五、注意事項?
?關(guān)鍵步驟?:
洗板后需拍干,避免殘留液體影響OD值。
顯色時(shí)間需嚴格控制,避免過(guò)度反應。
?樣本要求?:
避免使用溶血或脂血樣本。
糞便樣本建議新鮮采集或-80℃保存。
?試劑保存?:
未開(kāi)封試劑盒-20℃保存,開(kāi)封后按組分要求保存。
?說(shuō)明?:以上內容基于通用ELISA操作整理,具體操作請以試劑盒配套說(shuō)明書(shū)為準。
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