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　　雞層連蛋白板層素(LN)ELISA試劑盒實(shí)驗使用說(shuō)明書(shū) 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏(yíng)，是我們的發(fā)展目標，本生，您信任的合作伙伴！本生試劑盒

　　ELISA試劑盒技術(shù)流程

　　雙抗體夾心法(檢測未知抗原)

　　1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml，4℃ 過(guò)夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次。

　　2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌(同時(shí)做空白孔，陰性對照孔及陽(yáng)性對照孔)。

　　3、加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

　　4、加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

　　5、終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml

　　6、結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀(guān)察結果：反應孔內顏色越深，陽(yáng)性程度越強，陰性反應為無(wú)色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。

　　間接法(檢測未知抗體)

　　1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml， 每孔加0.1ml，4℃過(guò)夜。次日洗滌3次。

　　2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對照)

　　3、加酶標抗體：于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.05ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,最后一遍用DDW洗滌。

　　4、加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

　　5、終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml

　　6、結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀(guān)察結果：反應孔內顏色越深，陽(yáng)性程度越強，陰性反應為無(wú)色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。

　　ELISA試劑盒需自備的設備及試劑

　　1. 450±10nm濾光片的酶標儀(建議儀器使用前提前預熱)

　　2. 單道或多道微量加液器及吸頭

　　3. 稀釋樣品的EP管

　　4. 蒸餾水或去離子水

　　5. 吸水紙

　　6. 盛放洗液的容器

　　ELISA試劑盒試劑準備

　　1. 使用前將所有的試劑和標本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。

　　2. 標準品(凍干品)：每瓶標準品加入標準品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準備7個(gè)稀釋標準品的EP管，每個(gè)EP管中加入150μL的標準品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標準品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗結果有效性，每次實(shí)驗請使用新的標準品溶液。

　　3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進(jìn)行30倍稀釋。

　　ELISA試劑盒的儲存及有效期

　　1. 未開(kāi)封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存。請注意，收到試劑盒后請盡快將TMB 洗滌液，終止液保存于4℃，其他試劑保存于-20℃。

　　2. 使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存，開(kāi)封后的酶標板要加干燥劑后密封保存于-20℃，避免潮濕。

　　注意：

　　試劑盒內酶標條可拆卸，按實(shí)驗需求可分多次使用;使用后的剩余試劑盒建議在實(shí)驗后1個(gè)月內使用完畢。產(chǎn)品過(guò)期時(shí)間以盒子上的標簽為準，保質(zhì)期內所有組分都確保是穩定的。

　　ELISA試劑盒報告內容及標準

　　1、ELISA標準曲線(xiàn);

　　2、詳細的實(shí)驗步驟;

　　3、完整的實(shí)驗報告(試劑耗材，實(shí)驗方法，實(shí)驗結果及結果說(shuō)明);